Diagnosis and Detection of Infectious Bronchitis Virus Using RT-PCR Technology in Broiler Farms in Syria

استُخدمت تقانة تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR للكشف عن فيروس التهاب القصبات المعدي IBV) infectious bronchitis virus) في قطعان الفروج التجارية في سورية، حيث جمعت 50 عينة مرضية مشتبهة من أنسجة الرغامى في القصبة الهوائية، والكلى، من 50 قطيع من دجاج اللحم (الفروج) المشتبه بإصابتها بمرض التهاب القصبات المعدي infectious bronchitis (IB)، والموزّعة في مناطق مختلفة من سورية (اللاذقية، وطرطوس، وحماه، وريف دمشق). حيث تم استخلاص الحمض النووي الفيروسي RNA من أنسجة العينات المرضية مباشرة، ومن ثم تحويل RNA إلى cDNA بتقنية النسخ العكسي RT-PCR، واخضاعها لاختبار تفاعل PCR، وتفاعل Nested PCR. اختيرت البادئات المستخدمة في تفاعل RT-PCR من تحت وحدة S1 للمورثة S) spike) التي تتركز فيها الطفرات التي تصيب مورثة الفيروس في هذه المنطقة (منطقة شديدة التباين)، كما تم تمرير 10 من العينات الإيجابية المحتوية على الفيروس بأجنة الدجاج النامية الخالية من العوامل الممرضة، Specific pathogen free embryonated egg ((SPF بعمر 9-11 يوم تحضين وحسب الطرق المعتمدة في علم الفيروسات. نُفذ البحث في مخابر الهيئة العامة للبحوث العلمية الزراعية (مركز بحوث اللاذقية) بالتعاون مع مخبر PCR في كلية الطب البيطري بحماه. بيّنت نتائج اختبار RT-PCR، وجود 37 حالة إيجابية للاختبار وبنسبة 74% من عينات المزارع المختبرة، وأظهرت نتائج الحقن في أجنة الدجاج النامية آفات تشريحية واضحة ومميزة لفيروس التهاب القصبات المعدي بعد 5- 6 أيام من الحقن، وتأخر وعدم تطور ونمو الجنين (تقزم)، وتشابك أصابع ونزف دموي، بالمقارنة مع الشاهد السلبي، وأظهرت النتائج أيضاً حساسية تقنية RT-PCR للكشف عن فيروس IBV.

A reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) technique was used to detect infectious bronchitis virus (IBV) in the commercial broiler flocks in Syria. 50 tissue samples were taken from tracheal tissue, trachea and kidney of the broilers suspected of infectious bronchitis (IB) from different governorates of Syria i.e. Latakia, Tartous, Hama and Damascus countryside. RNA was extracted directly from the tissue samples and then RNA was converted to cDNA by RT-PCR technology; PCR reaction and Nested PCR interaction were carried out sequentially. The primers used in the RT-PCR reaction were selected from the S1 gene (spike), where mutations of the virus genome were concentrated in this region (the hypervariable region). Some positive samples (10) were injected at an age of 9-11 days old SPFEE-specific pathogen free embryonated eggs according to the methods adopted in virology. This research was carried out at the laboratories of Latakia Research Center, General Commission for Scientific Agricultural Research GCSAR, in cooperation with the PCR laboratory at the Faculty of Veterinary Medicine in Hama. The results showed the existence of 37 positive case for RT-PCR (74%), and the infectious embryos showed clear and characteristic anatomical lesions of the infectious bronchitis virus after 5-6 days post injection, delayed and undeveloped fetal (dwarfism), fingertip entanglement and hemorrhage compared with the negative control. The results also showed the sensitivity and speed of the RT-PCR test in the detection of the IBV virus.