Extraction and Purification of Lipoxygenase From Peanut Seed Arachis hypogaea. L

تضمنت الدراسة اختيار أفضل طريقة لاستخلاص الأنزيم من بين تـسع طرائـق، ركـز المحتـوى البروتيني باستخدام الترسيب بالأسيتون البارد من بين خمس طرائق للتركيز (التنقية الجزئية). و أكملـت مراحل التنقية باستخدام التبادل الأيوني الهلامي بعمـود (50-A Sephadex – DEAE) ، و مـن ثـم استخدام الترشيح الهلامي بعمود السيفاكريل 300-S إذ بلغت الفعالية النوعيـة 9.1162 وحـدة/ ملغـم بروتين و الحصيلة الأنزيمية مقدارها 18.43 % و عدد مرات التنقية 61.8 مرة. ثم التأكد من نقاوة الأنزيم بإجراء عملية الترحيل الكهربائي بغياب المواد الماسخة لبروتين إذ ظهرت حزمة بروتينية واحدة في هلام متعدد اكريل أمايد.

The study included the selection of the best methods to extract the enzyme among nine methods. The protein content was concentrated and precipitated by cold acetone among other five methods of concentration (partial purification). The purification stages were achieved by using ion exchange column chromatography (DEAE – Sephadex A 50 column). Followed by gel filtration chromatography using sephacryl S-300. The active parts were lyophlizated (free drying) to obtain Lipoxygenase with 43.18% yield and 8.16 folds of purification and specific activity of 1162.9 unit / mg. The purity of enzyme was confirmed by poly acryl amide gel electrophoresis under non denaturing conditions, with the appearance a single band .