Optimization of cellulase enzyme production by local isolates of Trichoderma.spp using wheat straws as substrates in submerged culture

جمعت 45 عينة تتضمنت عينات تربة و خشباً متحللاً و كمبوست فطر زراعـي مـستنزفاً مـن ثـلاث محافظات (دمشق، حمص، اللاذقية). شخصت منها مجهرياً 18 عزلة من جنس الفطـر Trichoderma و غُربلتْ العزلات من حيث قدرتها على إنتاج إنزيمات السلولاز من خلال تنميتها على أطباق بتري حاويـة على آغار كربوكسي ميتيل السلولوز كمصدرللكربون مدة 5 أيام، ثم حدد مقدار إنتاج الإنـزيم بالاعتمـاد على الهالة الشفافة المتشكلة حول المستعمرات بعد إضافة صبغة أحمر الكونغـو. أوضـحت الدراسـة أن العزلات Ti ،Tg ،Tr كانت الفُضلى في إنتاج السلولاز مقارنة بباقي العزلات، و تميزت العزلة Tr بـأعلى كفاءة إنزيمية إذْ وصل متوسط قطر الهالة حول المستعمرة إلى 7 ± 2.0 سم، ثم جـرت أمثلـة ظـروف الإنتاج في الوسط السائل باستخدام التـصميم الإحـصائي (RSM (methology surface response، فكانت درجة الحرارة المثلى 50.29˚م و درجة الحموضة المثلى pH = 6 و أفضل مدة تحـضين 4 أيـام، و أفضل سرعة دوران 175 دورة في الدقيقة و نسبة الركيزة (مسحوق تبن القمح) المثلـى 3 % و بينـت النتائج تأثيراً معنوياً للقيم المدروسة لكل من درجة الحرارة، و درجة الحموضة، و مدة التحضين، و سرعة التهوية، و تركيز الركيزة في فعالية الإنزيم.

45 samples were collected from various sources (soil, degraded wood and mushroom compost) from three cities (Damascus, Homs and Lattakia). 18 Trichoderma isolates were isolated and identified by microscope. These isolates were screened using CMC medium with Congo red dy to identify their ability to produce cellulase complex. The amount of enzyme production was determined depending on the radius of clear zone around the colony. Results showed that the most productive isolate was Tr with radius 7 ± 0.2 cm followed by Tg and Ti. Optimization of cellulase production was performed using response surface methodology (RSM). The optimal parameters were: temperature 29.5 ˚C, pH = 6، incubation time 4 days, aeration speed 175 rpm and wheat straw concentration 3%. All studied parameters had significant effect on cellulase enzyme activity.